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技術(shù)文獻(xiàn)

差異脲原體PCR檢測(cè)試劑盒使用方法

文字:[大][中][小] 2025-1-9    瀏覽次數(shù):335    
差異脲原體PCR檢測(cè)試劑盒使用方法:

  注:所有試劑使用前需完全解凍,混合均勻,6,000rpm離心數(shù)秒后使用。

  1. 樣本處理(樣本處理區(qū))

  待檢樣本的核酸提取可采用病毒RNA提取試劑盒或自動(dòng)化核酸提取儀等,具體提取方法請(qǐng)參照相關(guān)說明書。陽性質(zhì)控品及陰性質(zhì)控品無需提取,可直接使用。

  2. 擴(kuò)增試劑準(zhǔn)備(PCR前準(zhǔn)備區(qū))

  取N個(gè)(N=陰性質(zhì)控品+待檢樣本+陽性質(zhì)控品)PCR反應(yīng)管,每管分別加入FMD RT-PCR反應(yīng)液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據(jù)每頭份用量計(jì)算N+1份FMD RT-PCR反應(yīng)液、RT-PCR酶所需總量,兩者混勻離心后分裝20 μl至單個(gè)PCR反應(yīng)管)。

  組分每頭份用量FMD RT-PCR反應(yīng)液19 μlRT-PCR酶。

  1 .將所有PCR反應(yīng)管于6,000rpm離心30s,轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。

  2.加樣(樣本處理區(qū))

  3.在上述的PCR反應(yīng)管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質(zhì)控品和陽性質(zhì)控品各5 μl,蓋緊管蓋,于6,000rpm離心10s,轉(zhuǎn)移至擴(kuò)增區(qū)。

  樣本采集、存放及運(yùn)輸:

  1、樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集。

  2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h,-70℃以下可長期保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融(zui多凍融3次)。

  3、運(yùn)輸:采用泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。
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