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定量PCR試劑盒

豬流行性腹瀉病毒定量RT-PCR檢測試劑盒

文字:[大][中][小] 2024-3-19    瀏覽次數(shù):621    
商品屬性
產(chǎn)品名稱 規(guī)格 貨號
豬流行性腹瀉病毒定量RT-PCR檢測試劑盒
50T
YS-P015346
分類:PCR檢測試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運輸:低溫、避光。
有效期:一年

貨期:現(xiàn)貨PCR試劑盒的有效期一般為1年,這是指在適當(dāng)?shù)膬Υ鏈囟认隆:怂釘U增部分的試劑一般要貯存于-20℃下,產(chǎn)物檢測部分試劑則貯存于2-8℃。盡量避免反復(fù)凍融。


【結(jié)果分析條件設(shè)定】
u 基線(Baseline)設(shè)定:應(yīng)選擇該次實驗指數(shù)擴增前所有樣本熒光信號比較穩(wěn)定的一段區(qū)域(所有樣本熒光信號無較大波動),起始點(Start)應(yīng)避開熒光采集起始階段的信號波動,終止點(End)應(yīng)比最早出現(xiàn)指數(shù)擴增的樣本Ct值減少1~3個循環(huán),建議基線設(shè)為6~15。
u 閾值(Threshold)設(shè)定:將閾值線設(shè)定在剛好超過正常陰性質(zhì)控品擴增曲線的最高點。
【質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)】
1.   陰性質(zhì)控品的檢測結(jié)果應(yīng)為陰性,無指數(shù)擴增期,Ct=40或無Ct;
2.   陽性質(zhì)控品的檢測結(jié)果應(yīng)為陽性,有明顯的指數(shù)擴增期,Ct值應(yīng)小于等于35;
3.   以上要求需在一次實驗中同時滿足,否則該次實驗視為無效。
【結(jié)果判斷】
1.   陽性:有明顯的指數(shù)擴增期,且Ct<38;
2.可疑:有明顯的指數(shù)擴增期,且38≤Ct<40,此時樣本為可疑樣本;對于可疑樣本建議復(fù)核一次,若復(fù)核結(jié)果Ct<40且有指數(shù)擴增期,則判定為陽性,否則判定為陰性;
3.   陰性:無指數(shù)擴增期,Ct=40或無Ct值均判定為陰性樣本。
【對檢驗結(jié)果的解釋】
1.   實驗室環(huán)境污染、試劑污染、樣品交叉污染會出現(xiàn)假陽性結(jié)果;

2.   試劑運輸、保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測效能下降,可能會導(dǎo)致出現(xiàn)假陰性結(jié)果。


PCR反應(yīng)的特異性:
   ①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
   ②堿基配對原則;
   ③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
   ④靶基因的特異性與保守性。
豬流行性腹瀉病毒定量RT-PCR檢測試劑盒其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個細(xì)菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
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