細胞凋亡陽性對照試劑盒細胞內(nèi)總LDH的檢測

a.細胞毒性檢測：根據(jù)細胞的大小和生長速度將適量細胞接種到96孔細胞培養(yǎng)孔板中，使待檢測時細胞密度不超過80-90%滿。加入不同藥物進行處理，并設(shè)置適當(dāng)對照。藥物刺激完畢后，將細胞培養(yǎng)板用多孔板離心機400g離心5min。盡量吸除上清，加入150μl 用PBS稀釋了10倍的試劑盒提供的LDH釋放試劑(10體積PBS中加入1體積LDH釋放試劑并混勻)，適當(dāng)搖晃培養(yǎng)板混勻，然后繼續(xù)在細胞培養(yǎng)箱中孵育1小時。隨后將細胞培養(yǎng)板用多孔板離心機400g離心5min。分別取各孔的上清液120μl，加入到一新的96孔板相應(yīng)孔中，隨即進行樣品測定。

b.細胞增殖檢測：根據(jù)細胞的大小和生長速度將適量細胞接種到96孔細胞培養(yǎng)孔板中，使促進細胞增殖的藥物刺激后細胞不超過80-90%滿為宜。使用不同的藥物刺激細胞，并設(shè)置適當(dāng)對照。藥物刺激完畢后，將細胞培養(yǎng)板用多孔板離心機400g離心5min。盡量吸除上清，加入150μl 用PBS稀釋了10倍的試劑盒提供的LDH釋放試劑(10體積PBS中加入1體積LDH釋放試劑并混勻)，適當(dāng)搖晃混勻，然后繼續(xù)在細胞培養(yǎng)箱中孵育1小時。隨后將細胞培養(yǎng)板用多孔板離心機400g離心5min。分別取各孔上清液120μl，加入到一新的96孔板相應(yīng)孔中，隨即進行樣品測定。

? 注：LDH釋放檢測更加常用一些，細胞內(nèi)總LDH檢測通常可以使用MTT、WST-1或CCK-8等方法替代。

二、試劑盒的準(zhǔn)備工作：

a.INT溶液(1X)的配制：根據(jù)所需的INT溶液(1X)的量，取適量INT溶液(10X)用INT稀釋液稀釋至1X。例如，取20μl INT溶液(10X)，加入180μl INT稀釋液，混勻后即配置為200μl INT溶液(1X)。INT溶液(1X)宜現(xiàn)配現(xiàn)用，配置后4℃保存可于當(dāng)天使用，不宜配置后凍存。

b.LDH檢測工作液的配置:根據(jù)待測定的樣品數(shù)(含對照)，參考下表在臨檢測前新鮮配制適量的檢測工作液。

? 注意：LDH檢測工作液必須現(xiàn)配現(xiàn)用，配制和使用過程中均要注意適當(dāng)避光。