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技術文獻

免疫組化中封閉血清的原理,封閉血清的原理主要有兩點

文字:[大][中][小] 2019-7-1    瀏覽次數:437    
      都說是封閉,羊血清究竟封閉的是什么(抗原?)那接下來加一抗怎么又能反應結合?不是封閉了嗎?

      封閉的目的是為了減少非特異染色。

      這里,允許小編介紹下免疫組化中封閉血清的原理,封閉血清的原理主要有兩點:

       第一是待檢樣本會非特異性的和蛋白結合,從而導致背景過高,因此可以用BSA或血清封閉掉這部分非特異性的結合,從這點看,BSA和血清沒有明顯區別。

      第二是待檢樣本中可能會有Fc受體,可以和抗體恒定區結合,與抗體特異性無關,封閉血清中有抗體,因此用血清可以封閉掉一抗及二抗和樣本Fc受體之間結合。BSA則無法封閉Fc受體。

      免疫組化中用血清封閉的較多。封閉血清一般選擇和二抗同一來源的(如一抗為兔來源多抗,二抗為山羊抗兔IgG,那封閉液就用山羊血清),血清中動物自身的抗體,預先能和組織中有交叉反應的位點發生結合,否則在后面的步驟中如果和二抗發生結合,會造成背景。但要注意封閉用血清中不能含有目標蛋白,且與一抗來源不同。另外二抗因盡量少選取兔子或老鼠來源的,因為這兩個在親緣關系上和人類非常接近,所以產生交叉反應的機會就比較大,從而導致背景比較高。!適合選用來源于驢,山羊,綿羊等的二抗,背景相對就很低。

      所以二抗來源的動物血清封閉的是組織上帶電荷基團。因為組織中非抗原抗體反應出現的非特異性背景染色,最常見的原因是蛋白吸附于高電荷的膠元和結締組織成分上。這并不影響接下來一抗的結合,因為這種結合是特異的,親和力遠遠高于因電荷作用的結合,因此會競爭勝出。


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